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用聚合酶链反应检测CO2激光治疗尖锐湿疣烟雾中的HPVDNA

发布时间： 2016-07-11 18:14:45 来源：健康族

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用聚合酶链反应检测CO2激光治疗尖锐湿疣烟雾中的HPVDNA

中华皮肤科杂志1998年第3期第31卷论著摘要

作者：吴原戴利成宋颖沈翠芬

单位：313000浙江省湖州市第二医院皮肤科(吴原宋颖)，PCR室(戴利成沈翠芬)

CO2激光作为治疗尖锐湿疣的有效手段被广泛应用，但我们在临床中发现少数患者治疗后出现尖锐湿疣复发。因此，我们自1997年1～4月收集了CO2激光治疗尖锐湿疣的烟雾标本，用PCR方法进行HPVDNA的检测，现报道如下。

一、材料和方法

(一)标本来源：20例均为具有典型皮损，临床确诊为尖锐湿疣的门诊患者。其分布部位为冠状沟、包皮、阴茎、大小阴唇。

(二)标本的收集和贮存：治疗前后用短波紫外线对操作周围进行照射消毒。将CO2激光调至10W左右，激光枪与垂直线呈10°～20°角，使飞溅的烟雾能不受阻挡垂直上升。同时在疣体上方2cm处，用生理盐水浸润的消毒棉签熏蒸，时间尽可能长，使棉签呈焦黄色，不可碰触疣体及激光头，否则将其删除。之后将棉签放入消毒试管中，-4℃冷藏待测。

(三)PCR：采用军事医学科学院放射医学研究所生产的PCR诊断试验盒，内含HPV6、11DNA引物，具体步骤如下。将标本充分溶于0.5ml离心管中，加200μl生理盐水混匀，8000r/min离心5分钟，弃上清液，加50μl裂解液，55℃1小时后，100℃煮沸10分钟，15000r/min离心10分钟，取上清液5μl作为HPVDNA模板，加入PCR混合物15μl，裂解液0.2μl，石蜡油20μl混合，按下列条件进行PCR扩增。变性94℃、60秒；退火50℃、60秒；延伸72℃、60秒；循环次数35次。取PCR扩增溶液10μl直接上样于1.5%琼脂糖凝胶进行电泳，在紫外灯光下观察有450bp的橙色荧光带者即为阳性。同时对试验盒内阴阳性对照标本进行同样处理。

二、结果

20份烟雾标本中有1份阳性。并将阳性标本送浙江医科大学重复检测，证实确为阳性。在PCR检测中，试验盒中对照标本均相应显示。

三、讨论

Carden等［1］证实CO2激光烟雾中有存活的HPV。少量CO2激光烟雾中存在HPV的原因主要有：①疣体突出部分较疏松，大功率CO2激光照射时，其光压易使疣组织向四周飞溅。②由于CO2激光使组织气化时，形成微型爆炸，当其发生在突出的疣体侧缘时，易使上端较疏松的疣组织向四周播散。顾恒等［2］对21例尖锐湿疣CO2激光烟尘中的HPV进行PCR测定，均为阴性。而我们检测了20例，有1例HPV6、11型DNA阳性。产生两者差异的原因可能为观察例数较少，而出现概率上的差异。

参考文献

1GardenJM,O′BanionMK,ShelnitzLS,etal.Papillomavirusinthevaporofcarbondioxidelaser-treatedverrucae.JAMA,1988,259∶1199-1202.

2顾恒,常宝珠,陈,等.CO2激光治疗尖锐湿疣烟尘中HPVDNA的检测.中华皮肤科杂志,1997,30∶175-177.

（责任编辑：zxwq）

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