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天疱疮患者血清白介素-6、肿瘤坏死因子-α的检测分析

发布时间: 2016-07-11 18:15:07      来源:健康族

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天疱疮患者血清白介素-6、肿瘤坏死因子-α的检测分析中华皮肤科杂志1999年第4期第32卷论著作者:周淑华林麟培英王海燕胡涛高美华王峰来桑红桂单位:210042南京,中国医学科学院

天疱疮患者血清白介素-6、肿瘤坏死因子-α的检测分析

中华皮肤科杂志1999年第4期第32卷论著

作者:周淑华林麟培英王海燕胡涛高美华王峰来桑红桂

单位:210042南京,中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所(周淑华林麟靳培英王峰来桑红桂);山东滨州医学院免疫学研究室(王海燕胡涛高美华)

关键词:天疱疮白细胞介素-6肿瘤坏死因子

【摘要】目的探讨白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在天疱疮发病机理中的作用以及患者血清中这2种细胞因子水平与天疱疮病情的关系。方法用双抗体夹心ELISA法检测了26例寻常型天疱疮(PV),14例红斑型天疱疮(PE)患者治疗前、8例经有效治疗皮损全部消退的PV患者及23例正常人血清中IL-6、TNF-α水平,并测定了4例PV患者治疗前疱液中IL-6、TNF-α水平。结果天疱疮患者治疗前血清中IL-6、TNF-α水平显著高于健康对照组(P<0.01);2种细胞因子水平均与皮损面积呈正相关(P<0.01);随皮损消退其水平降低(P<0.05)。4例PV患者疱液中IL-6、TNF-α水平均高于相应血清中水平。结论天疱疮患者血清中IL-6、TNF-α水平与天疱疮病情活动性相关.IL-6、TNF-α可能参与了开疱疮的发病。

Interleukin-6andTumorNecrosisFactor-αinSera

ofPatientswithPemphigus

ZHOUShuhua,LINLin,JINPeiying,etal.

InstituteofDermatology,ChineseAcademyofMedicalSciences,

PekingUnionMedicalCollege,Nanjing210042

【Abstract】ObjectiveToelucidatetheroleofinterleukin-6(IL-6)andtumornecrosisfactor-α(TNF-α)inthepathogenesisofpemphigus,andtofindouttherelationshipbetweenthetwocytokinesandtheactivityofthedisease.MethodsTheserumlevelsofIL-6,TNF-αweredeterminedbydoubleantibodysandwichenzyme-ikedimmunosorbantassay(ELISA)in26patientswithpemphigusvulgaris(PV)and14patientswithpemphiguserythematosus(PE)priortotreatment,in8PVpatientsaftercompleteclearingoftheskinlesionsandin23normalcontrols.ThelevelsofIL-6andTNF-αwerealsotestedintheblisterfluidobtainedfrom4PVpatientsatthesametimewhentheserumsamplesweretaken.ResultsTheresultsshowedthattheserumlevelsofIL-6andTNF-αweresignificantlyhigherinpatientswithpemphigusthanthatinnormalcontrols(P<0.01).AsignificantcorrelationwasfoundbetweentheserumlevelsofIL-6andthetotalareaoflesionsforeachpatient(P<0.01).Theserumlevelsofthetwocytokinesdeclinedastheskinlesionhadcompletelydisappeared(P<0.05).ThelevelsofbothIL-6andTNF-αintheblisterfluidof4PVpatientswerehigherthanthatintheserumsamplesobtainedatthesametime.ConclusionTheresultsindicatethatthereisarelationshipbetweentheserumlevelsofIL-6andTNF-αandtheactivityofpemphigus.TheresultsalsosuggestthatIL-6andTNF-αplayanimportantroleinthepathogenesisofpemphigus.

【Keywords】PemphigusInterleukin-6Tumornecrosisfactor

天疱疮为一少见的自身免疫性大疱性皮肤病。抗表皮细胞间物质的自身抗体与表皮角质形成细胞桥粒芯蛋白结合,导致表皮棘层松解。抗体的致病性已被证实[1]。在天疱疮发病机理方面,过去对抗原抗体反应研究较详细,而细胞免疫在发病机理中的作用不清楚。近年来研究发现细胞免疫可能参与了天疱疮的发病[2,3]。研究天疱疮患者血清中细胞因子,可更全面地认识天疱疮发病中免疫学机理。本研究用夹心ELISA法测定了26例寻常型天疱疮(PV),14例红斑型天疱疮(PE)患者治疗前血清中白介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并对8例经有效治疗皮损消退PV患者的血清IL-6、TNF-α水平及4例PV患者疱液中IL--6、TNF-α水平进行了检测,以探讨它们在天疱疮发病机理中的作用,以及患者血清中IL-6、TNF-α水平与病情的关系。

材料与方法

(一)研究对象:病例为1995年1月至1998年5月本所医院门诊或住院的部分天疱疮患者,临床资料完整,共40例,其中男25例,女15例,年龄17~83岁。PV组26例,符合PV典型的临床表现与组织病理学特点;PE组14例,符合PE典型的临床表现与组织病理学特点。所有患者均经直接免疫荧光证实诊断。33例患者经间接免疫荧光检测了循环天疱疮抗体滴度。治疗前仔细体检,依据天疱疮类型、皮损面积占体表面积百分率、有无粘膜损害等给予不同剂量的皮质类固醇治疗。于治疗前及皮损消退时采血,用于检测IL-6、TNF-α水平。治疗前4例PV患者,于采血同时抽取完整水疱疱液进行检测。正常对照组为健康体检者,共23例。其中男15例,女8例,年龄19~71岁。

(二)研究方法:

标本采集:晨空腹常规静脉采血,分离血清,-20℃保存待测。疱液采集:常规消毒皮损,无菌注射器抽取疱液,2000r/min离心10min,收集上清液,-20℃保存待测。

实验方法:IL-6、TNF-α酶标试剂盒购自第四军医大学免疫学研究室。采用酶标双抗体夹心ELISA法检测血清及疱液中IL-6、TNF-α水平。用美国产Multiskan全自动酶标仪,输入标准浓度后,测吸光度,绘制标准曲线,自动计算出待测样品含量。

统计学方法:因不能确定所测结果的分布类型,数据以中位数、范围表示。结果采用非参数秩和检验与Spearman等级相关分析。

结果

(一)天疱疮患者血清IL-6、TNF-α水平显著高于对照组。经秩和检验,U值分别为4.54与3.02,P<0.01,见表1。PV组与PE组治疗前血清IL-6水平、TNF-α水平差异无显著性(P>0.05),见表1。

表1天疱疮患者与正常对照组血清IL-6及TNF-α水平

组别例数IL-6(ng/mL)TNF-α(ng/mL)中位数范围U值中位数范围U值对照组230.1240.02~0.4684.54*0.1970.002~0.7043.02*开疱疮组400.5080.091~2.5400.3870.056~1.3900.43寻常型260.541.0.091~2.4360.440.4510.074~1.390经斑型140.4200.098~2.5400.3450.056~0.938注:采用秩和检验,*P<0.01

(二)Spearman等级相关分析:非参数等级相关分析结果,两型天疱疮中,皮损面积与血清IL-6、TNF-α水平均呈正相关(PV组rs分别为0.468、0.501,P<0.01;PE组rs分别为0.671、0.657,P<0.01).患者血清中IL-6与TNF-α水平呈正相关(rs=0.597,P<0.01)。患者血清IL-6、TNF-α水平与天疱疮抗体滴度间无相关性(rs分别为0.320、0.342,P>0.05).

(三)8例PV患者治疗前与皮损全部消退时血清IL-6水平分别为1.294ng/mL(0.508~2.463ng/mL)与0.443ng/mL(0.091~1.460ng/mL),经配对资料非参数Wilcoxon法分析,U=2.52,P<0.05;TNF-α治疗前后分别为0.662ng/mL(0.402~1.390ng/mL)与0.292mg/mL(0.249~0.776ng/mL),U=2.52,P<0.05.

(四)4例PV患者完整水疱疱液中IL-6、TNF-α水平均高于相应血清中含量。

讨论

本研究结果显示,天疱疮患者血清IL-6、TNF-α水平较健康对照组显著增高。在两型天疱疮中,血清IL-6、TNF-α水平与皮损面积均呈正相关,在有效的系统皮质类固醇治疗后,皮损全部消退时其水平显著降低。血清中IL-6与TNF-α水平呈正相关。表明患者血清中IL-6、TNF-α水平与天疱疮病情活动性相关。

天疱疮患者表皮细胞间IgG抗体的沉积,不仅限于发病处皮肤,外观正常皮肤处也有IgG沉积,故推测除抗体之外,其它机制可能参与了水疱的形成[2]。过去的研究中发现天疱疮皮损处有较多单一核细胞浸润,其作用不明[2]。Zillikens等[2]用免疫组化研究发现,天疱疮皮损处真皮及表皮T淋巴细胞、单核-巨噬细胞均显著多于皮损周围皮肤,同时活化T淋巴细胞增多。真皮处以T细胞浸润为主,表皮处以单核-巨噬细胞为主。在PV,表皮浸润细胞集中于基底层上方;在PE,浸润细胞散布于整个表皮。表明天疱疮皮损处有大量单核-巨噬细胞与T淋巴细胞浸润。而单核-巨噬细胞及T细胞是TNF-α的主要来源,也是IL-6的重要来源。结合本文研究结果,患者血清中IL-6、TNF-α水平与皮损面积呈正相关,随皮损消退而下降;PV患者疱液中IL6、TNF-α水平高于相应血清中水平。推测血清中IL-6、TNF-α可能来源于皮损局部的单核-巨噬细胞、T细胞等浸润细胞。因单核-巨噬细胞与T细胞及其分泌的细胞因子是细胞免疫主要的参与者,以上研究结果支持细胞免疫在天疱疮发病机理中发挥重要作用。最近Lin等研究表明,重组桥粒芯蛋白Dsg1与Dsg3(分别为PE、PV的抗原)可在体外刺激具有循环天疱疮抗体的PV患者的T淋巴细胞发生增殖反应[3,4]。证实T细胞免疫在天疱疮发病中的作用。

本研究结果中,PV与PE患者血清中两种细胞因子水平差异无显著性,结合Zillikens的研究结果,推测可能因PV与PE皮损局部浸润细胞的种类、数量、功能相似,只是分布不同。当皮损局部产生的细胞因子释放入血流时,其水平差异无显著性。

因天疱疮患者水疱易破,疱液采集困难,故本文检测的疱液例数较少。由于方法所限,无法确定IL-6、TNF-α的来源。

参考文献

1AmagaiM,KochPJ,NishikawaT,etal.Pemphigusvulgarisantigen(Desmoglein-3)islocalizedinthelowerepidermis,thesiteofblisterformationinpatients.JInvestDermatol,1996,106:351-355.

2ZillikensD,AmbachA,ZentnerA,etal.Evidenceforcellmediatedimmunemechanismsinthepathologyofpemphigus.BrJDermatol,1993,128:636-643.

3LinMS,SwartzSJ,LopezA,etal.TlymphocytesfromasubsetofpatientswithpemphigusvulgarisrespondtobothDesmoglein-3andDesmoglein-1.JInvestDermatol,1997,109:734-737.

4LinMS,SwartzSJ,LopezA,etal.Developmentandcharacterizationofdesmoglein-3specificTcellsfrompatientswithpemphigusvulgaris.JClinInvest,1997b,99:31-40.

收稿:1998-10-26修回:1999-01-08

(责任编辑:zxwq)

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