分光光度法测定益气胶囊皂苷含量

　　益气胶囊由人参、黄芪、甘草、枸杞子等多味中药制成，人参为方中主药，可通过测定其中人参皂苷类成分含量来控制产品质量。

　　我们参照文献[1-3]，以人参皂苷rg1为对照，用大孔吸附树脂柱分离比色法测定益气胶囊中人参总皂苷的含量，现将结果报告如下。

　　1 仪器和试剂 uv-201型紫外可见分光光度计(日本岛津);树脂柱(7mm10cm)。人参皂苷rg1对照品(中国药品生物制品鉴定所);大孔吸附树脂(d101，天津制胶厂);香草醛、硫酸、氢氧化钠、乙醇和甲醇等均为分析纯;益气胶囊(第三军医大学第三附属医院试制，1mg/粒)。

　　2 方法和结果 2.1 溶液配制 2.1.1 对照品溶液配制取干燥至恒重的人参皂苷rg1对照品约12mg，精密称定，制成浓度为0.4852mg/ml的溶液备用。

　　2.1.2 供试品溶液及阴性对照液的制备取本品20粒倾出内容物，混匀，取约1g，紧密称定，加甲醇15ml于水浴锅中加热回流提取两次(每次30min)，滤过，滤液浓缩至20ml，转移至25ml量瓶中，用甲醇定量，摇匀，精取10ml于蒸发皿中，置水浴上挥去甲醇，残渣加水10ml使溶解。

　　水溶液上d101型大孔吸附树脂(树脂采用湿法装柱，柱高12cm)。

　　在树脂柱顶端精密加入上述样品溶液10ml，待液面降至棉花层，加入2个柱体积蒸馏水，流速为0.15ml/min，弃去水溶液，再用0.1%naoh溶液1.5个柱体积洗脱，弃去碱液，然后用1个柱体积的15%乙醇洗脱，弃去洗脱液(碱和15%乙醇除去糖类、黄酮类等水溶性杂质)。

　　继用6个柱体积70%乙醇洗脱，收集乙醇液于坩埚中，置水浴上挥干，残渣加甲醇溶解并分次转移至10ml量瓶中，作为供试品液。另同法制得不含人参黄芪甘草药材的阴性空白对照液。

　　2.1.3 吸附树脂的预处理和再生取大孔吸附树脂d101适量，用无水乙醇加热回流2h后，放冷，装柱。然后用无水乙醇反复洗脱，洗至洗脱液与水(1:2)混合不产生浑浊。

　　再用蒸馏水反复洗至洗脱液无醇味并树脂柱不再下降时即可，以蒸馏水浸没备用。再生则用95%乙醇洗至无色，以大量水洗去醇。若树脂已经反复使用，则用1mol/lnaoh(hcl)洗涤或浸泡适当时间，至树脂接近原色为宜，再用蒸馏水洗至中性。

　　2.2 测定波长的选择取对照品溶液、供试品溶液和阴性空白对照液各1ml，注入具塞试管中，水浴加热挥去甲醇，放冷，加入8%香草醛乙醇溶液1ml与70%的硫酸5ml,摇匀，混合物置60°c水浴中加热15min后立即在冰水浴中冷却15min。

　　随行试剂作平行空白对照，于uv-201型紫外可见光分光光度计，在400~700nm范围内进行光谱扫描。由图可见，供试品溶液与对照品溶液在542nm波长处有最大吸收，阴性空白对照液在该处无吸收，故确定测定波长为542nm。

　　2.3 方法学 2.3.1 标准曲线取人参皂苷rg1对照品溶液5ml置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.20、0.40、0.50、0.60、0.80ml，按上述方法操作，随行试剂空白，按照分光光度法试验，在542nm波长处测定吸收度。

　　以吸收度为纵坐标，人参皂苷rg1含量为横坐标，绘制标准曲线，线性方程为y=5.7356x-0.176，r=0.9990，人参皂苷rg1在0.049~0.194mg/ml范围内线性关系良好。

　　2.3.2 精密度实验精密吸取对照品溶液0.5ml5份，依法显色后测定吸收度，结果rsd为2.97%，说明精密度良好。

　　2.3.3 重复性实验取批号为08031的样品，分别称取1.0321、1.0247、1.024、1.0128、1.0573、1.0652g，依法分别测定吸收度，结果，吸收度的平均值为0.675+0.021，rsd=3.11%。

　　2.3.4 回收率实验将一定量的人参皂苷rg1对照品溶液加入缺人参黄芪甘草药材的阴性空白制剂中，按标准曲线法测定人参总皂苷的含量，计算回收率。

　　2.3.5 样品含量测定取批号为08032、08033、08034、08035的4批样品依法进行测定，得样品含量分别为2.408、2.315、2.754、2.671mg/g，标示量分别为0.24%、0.23%、0.28%、0.27%，批间差异较小。

　　3 讨论实验中曾考虑用液液萃取的方法来制备样品，发现样品损失量大，吸收值低，且最大吸收波长与人参皂苷rg1相比差异较大，最后选用大孔吸附树脂来处理样品。大孔吸附树脂选择性好、吸附容量大、解吸容易、再生简便，能够满足样品分离的要求。

　　实验中光谱扫描时偶然发现香草醛用量1ml比0.5ml吸收峰峰形更显着，最后将香草醛的用量定为1ml，方法因而更灵敏。此外，实验中还发现，显色剂加入量准确与否、显色剂加入时间、水浴温度是否恒定等也会影响方法的准确性和重现性。

　　采用大孔吸附树脂分离-比色法测定益气胶囊中的人参总皂苷，方法简便、快速、准确、重复性好，可用作益气胶囊的质量控制。

　　参考文献： [1]李蕾,赵艳荣,邸立杰,等.参鳖养心口服液的薄层色谱鉴别和人参总皂苷的测定[j].华西药学杂志,1999,14(3):183-184.

　　[2]解蕙铭.分光光度法测定西洋参及西洋红参中人参总皂苷的含量[j].新医学学刊,2008,5(9):6051.

　　[3]李涛,王天志,吴维碧.大孔吸附树脂分离-比色法测定益肝口服液中人参总皂苷[j].华西药学杂志,2004,19(5):366-367.

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