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22Jouraa／ofCti,a~andExperimentalMedicineV01.6.Ⅳ0.5May.2007冰冻保存Rh阴性稀有血液方法的建立张国清杨玉发彭丽珍欧阳玲钟秀霞李庚娣（深圳市宝安区血站广东深圳518101）【摘要】目的探索一种甘油化冰冻保存Rh阴性红细胞制备、融化覆洗涤等环节的可行性方法。方法取22袋（iu／~）Rh阴性全血.在制备甘油化红细胞时，采用电子摇摆秤和输血器自动控制法代替手工摇摆法控制甘油流速和流量；37~C一42℃水浴融化后，在洗涤Rh阴性冰冻红细胞时，采用9％氯化钠（NaCI）高渗溶液平衡J舌，再用0・9％NaCl等渗溶液洗涤二次，井计算红细胞的曰收率及其相关指控指标。结果冰冻红细胞的回收率为（87.52±231）％，而甘油残余量、上清液游离血红蛋白（Hb）含量厦体外溶血率分别为（6.76±238）s／L、（073±0.05）g／L7t_（978±l・85）％。结论采用上述简化方法制备、融化及洗涤冰冻红细胞，不仅缩短了时问，而且获得较满意的红细胞回收率・其他相关质控指标也均符舍国家标准。【关键词】Rh阴性红细胞冰冻甘油化洗涤回收率ThedevelopmentofmethodforthepreservationotRh蹦名i蜥efrozenblood.ZHANGc∞一g咄F，YANGYu一，d，PENGⅡ一zben，etdBooanBloodDonor~eggre.Shend~en‰^g娜518101，CMrm【Abstract】ObjectiveTodevelopafeasiblemethodforpreservingfrownRhnegativeredbloodcells（RBCs）withglycerin，includingthep…ofpreparation.thaw丑ndwashetcMethodsRBCsofRhnegativeb100d（22bags）wereglycerallzed，u。mgtheeleetronieswinghal一…dbloodfiherl…tensilforautoⅢalleallycontrollingtheflowl~tteandflowcapacityofglycerin，insteadofswingbyh∞d。ThefrozenRBCswe陀thawedinwflterbathat37~C一42'EWhilew~hed.山eRh.eS~vefrozenRBCswe弛balancedwithhypcrosmotie（9％）NaCIsolution；afterthatRBC…Iewashedtwicewith09％NaCI.thenRBC~veryIakandco~spondingquality~ntrolindic~㈣eaculatedResultsThe~eoveryrateoffrozenRBCs㈣8752±231％Residualquantityofglycerin.supematantfreeHboolite,l'ltandinvitrohemolyticFatewere676±238g／1.073±005e,／dland9.78±1.85％.respectivelyConcl~donTheabovesimplified~thodincludingthep~essofprepara-tion.thawandw“。notonlyshortenthetime，hutalsohsatisfactoryRBCrecovery“t。；correspondingqualitycontrolindicesmeetthenationalrequirment蚰well.【Keywords]sRhnegativeRBCs；Frozen；Glycerolisation；Wash；R~overyrateRh阴性稀有血液的供应一壹是输血界的难题。为了保证临床急诊Rh阴性患者输血的需要，建立Bh阴性血液深低温冰冻长期保存是唯一有效的方法…。本站从2005年10月至今开展了Rh阴性稀有血液的深低温冰冻保存，并制备了冰冻红细胞22袋。笔者对22袋冰冻红细胞的制备、融化及洗涤去甘油的工艺方法进行了改进，提高了红细胞的回收率，其他相关质控指标也获得了较满意的效果。现将结果报告如下。1材料与方法1.1仪器与材料一舳℃血库专用低温冰箱（日本SANYO公司生产）；D一37520型大容量离心机（德国Heraeus公司生产）；ACS一152型热合机（13本泰尔茂公司生产）；电子恒温三用水浴箱（汕头市医用设备厂）；BC一3000plus全自动血细胞分析仪（深圳迈瑞医疗仪器公司）；723型分光光度计（上海医疗仪器仪器厂）；一次性无菌空袋、连接管（华南塑料制品厂）；57.1％复方甘油保存液、9％NaCI溶液、三珠冷冻袋（北京博德桑特输采血器材公司）。0.9％NaCI注射液（四川科伦药业股份有限公司）。12冰冻红细胞的制备方法参照高浓度甘油方法”’进行了改进。①将采集2―6d内的Rh阴性全血（血液保存液为CPD配方）22袋（1U／袋），经（3500rpm.10min）离心分离出血浆、血小板及部分白膜层。将红细胞移至三珠冷冻袋，采用电子摇摆秤和输血器自动控制法，向剩余的红细胞内准确、均匀的加入57.1％复方甘油保存液160ml，速度控制应先慢后快，并采用电子摇摆秤不断振荡混匀，于5～10rain加毕（一般8min为宜），使最终浓度为40％（注意：加完甘油后，需排尽血袋内的空气）。在室温基金项目：奉课题是2005年深圳市宝安区科技局赉助项目.No2005183平衡30min后，离心去除上清多余的甘油化试剂，放入一80℃冰箱保存。②将一80。c冰箱保存的血液取出，置37~C～42℃水浴中快速解冻（一般3min内融化），注意水浴箱中的水一定要浸没血袋，不断摇动.使血袋与水充分接触，加速其融化，但不能用力去挤压血袋，减少红细胞在溶化过程中的机械损伤。融化后的血袋要在室温静止10min，让红细胞得到充分休息，增强红细胞的抗破坏能力。③向融化后的冰冻红细胞中加人40ml9％NaGl（15ml／min），同时振荡摇匀，平衡5min。再加入0.9％NaCI250ml，混匀.再平衡5min。离心去上清，再用0.9％NaCI400～500ml，洗涤1次，去甘油。加入100ml09％NaCI溶液悬浮红细胞，供质量检测使用。I.3冰冻红细胞的质量检测I.3.1甘油残余量采用甘油磷酸氧化酶法测定”’。1.3.2上清液游离血红蛋自【Hb）含采用氰化高铁法测定（BC一3000plus全自动血细胞分析仪检测）。I.3.3体外溶血试验体外溶血率=（37℃水浴后上清Hb含量一37"C水浴前上清Fib含量）／37℃水浴前上清Hb含量×1（30％。1.3.4红细胞回收率红细胞回收率=成品Hb含量／（总上清Hb含量+成品Hb含量）×100％。2结果22袋冰冻甘油红细胞冰冻保存时间为60～90d，解冻融化洗涤后的红细胞形态，在显微镜下观察细胞膜完整，表面呈双凹状，无团聚现象，经过2次洗涤后红细胞回收率为（87.52±2.31）％，优级于国家质量标准（／>80％）。其他相关的质控指标均
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